First of all, I want to clarify several disputing issues:
1. Is Rta functional in the cytoplasm? Maybe, but most of the time Rta is working hard in the nucleus.表現量過多,過快,或是一邊進核一邊在胞質內”到此一遊留點紀念”的功能不是今天討論範圍.同理RtaNLSm在我心目中是一個細胞質蛋白,它的主要活性與核內的Rta應是截然不同的.
2. Does over-expression of Rta lead to MN formation in EBV-ve cells?是的,在楚穎論文裡,所算的p值都是許多次實驗重複驗證而成.據聞旻潔加做的synchronize細胞也可觀察到許多multinucleated, binucleated, and mis-segregated cells.
3. Does Rta-mediated MN formation contribute to NPC tumorigenesis?傾向不是.因為在有病毒genome存在下,Rta和其所活化的病毒蛋白會造成細胞停止生長或是凋亡.也就是說 cell cycle還走不到anaphase可能就死了(這個議題應在等我們有充份能力調控Rta在病毒感染細胞中的量時,再來探討)
基於上述三個成見,我想跟大家討論下面幾個問題:
1. Rta versus G2/M: 歆蘭,勝彥,楚穎以及現在旻潔都提到Rta對M phase的加速離開有貢獻.但是我這幾天仔細讀楚穎論文中圖七(B)之flow data,感覺上是有Rta的那一組停在G2/M較多時間(release後8,10h 比較)或是花較多時間進入G2/M(solvent組花6h達78%,Rta組花8h達79%);圖九(B)中有Rta的細胞在0點時, CCNB/CDK1/AuroraB等M期蛋白均較solvent control組少. Together, it seems to me that cells expressing Rta take longer to prepare for G2/M progression.
2. Rta versus AKT/ERK: Again, from楚穎論文圖七,圖八有Rta的細胞ERK1/2活性是有增加,而且聽說勝彥也有證據說明AKT也會on.所以Rta和mitogenic這條pathway是有影響作用的.但是影響的機致是什麼呢?因為第一段話的第一個成見,所以我比較傾向的推測是(1)會不會ERK1/2在某個時間應是被shut-down的(如圖七(B)solvent control r6, r8),但是因為有Rta時這個checkpoint的到達非常不容易,因此大多數看到的western blot analysis ERK1/2都是on的.(2)會不會Rta直接down-regulates某個phosphatase的表現(在我們的293TetER中 CDK4/CDK6/CCND1都是顯著被Rta down-regulation)
謅不出來了.提供二篇好文章,大家來腦力激盪一下!有想法盡量po上來,每個人貢獻一點積少定能成多! 下回見. ERK與cell cycle; PI3K/Akt與cell cycle.This one is also good!
雖然我是個離開的人兒，但最上面三個成見，我不能同意更多。尤其是對於親手搞出NLSm的我來說，個人認為把它當作一個小小的工具就好，不要深究NLSm於細胞質的功能問題，那本來就不是一個自然的東西。
至於Rta和ERK/Akt pathway的關連，數年前就有好幾篇paper就想把他們牽連起來了，這種說法是其來有自啊~但若與down-regulates phospatase有關…要不要把以前做kinase/phospatase array的資料調出來比一比?
PS:可能沒什麼input,不過目前寫臨床試驗報告書寫到煩,特來紓解一下…
好感人,妳竟然讀了SFL寫的東西.這三天颱風假期中我對這個問題又整理了一下.為了報答妳的熱情明天我會把它們po文發表!什麼是kinase/phosphatase array?找誰會知道這個東西?另外是妳那366/367AA的OGlcNAc突變株(另外一個Rta啦),1.23倍的上升倍數,竟然,竟然可以被YCK repeat出來,而且是有統計意義的.剛才meeting時聽到這個,我全身發冷汗吶…
沒有MSN表情符號真是不可愛!
我想表達一下我的崇敬之意,老師真是非常會整理東西……崇拜一下!
inducible clone算是Rta-overexpressing的狀態嗎?我怎麼老是有個印象,它的表現量和NA受TPA+SB-induction時差不多?
G2進行的慢一點,應該不是不能解釋的問題,請參閱上次寄給你的IFA照片下方的引用文獻,口試前三天看到那篇paper時有種如穫至寶的感覺哪!(那篇還是從我的paper庫存中挖出來重見天日的……慚愧中)
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蝦米啊!! 我的data被repeat出來了!
真是超感動的啦~~ YCK真是我的好搭檔啊!
很欣喜吧!喂喂,等一下再走,真的有Rta-kinase/phosphatase array這樣東西嗎?
什麼?現在還沒有喔?
ㄟ…我是從某人的kinase/phosphatase profiling 計劃猜想，目前可能已經有類似的技術啦…
PS:會不會有人從”感動”..轉變成”PWW妳之前到底在實驗做什麼”..這樣咧?? 😛
某人的上司不准啊(冷嘲+熱諷),同輩持疑(+提要不要先做他們最愛的基因),屬下讚賞(一個只有二隻手在做的計畫),好苦的回憶啊..不過還是謝謝你的idea.