40對T/N檢體相關Paper
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Lab Meeting
20121205 小夏報告
分享兩篇paper1. 這篇: A model for ligand-induced DDR1 shedding.(1) DDR1 在沒有collagen存在下，為全長125kDa的蛋白質。(2) collagen刺激之下誘導DDR1 autophosphorylation，引起sheddase活化，進而將DDR1從細胞表面切成兩段(ectodomain shedding)。(3) ectodomain shedding後，產生soluble DDR1 (a-subunit) 及membrane-anchored truncated DDR1 (beta-subunit) ，此時膜上的DDR1為tyrosine-phosphorylated 62kDa的蛋白質。 ->因此猜測在OSCC細胞中Glivec處理之下，我們看到DDR1全長的增加的同時應該也可以看到62kDa DDR1的減少。->對照我們的4株OSCC細胞在Glivec處理之下，62kDa DDR1在C9及OEC-M1中確實可以看到有下降的現象，撇開OC3來講，TW2.6仍需要再次確認這件事情。 2. 這篇: Discoidin domain receptor 1: isoform expression and potential functions in cirrhotic human liver. 肝硬化病人肝組織中全長的DDR1較正常人來得少，而shed DDR1 fragments較正常人多。->已將cytosol改為soluble。 修改後的報告PPT檔案已放入NAS上。
07/18 小丸報告
1.為了補強DDR1 paper的圖表，重新做了shAXL, shDDR1, shEGFR, shFGFR3的實驗，發現它們對OSCC細胞的生長抑制作用(WST-1 assay)有程度上的差異，其中DDR1在48h對細胞的抑制平均而言可達三成左右。2.取OEC-M1為cell model，證實Glivec可以降低DDR1 auto-phosphorylation之程度。3.Collagen type IV處理的HOK及TW2.6細胞中，可見及DDR1表現量增加，其餘細胞的相關實驗則由小夏幫忙檢測中。
Let’s Move On!
4/10 SFL wrote:Sorry FYC, 多兩篇給你! (ref new 1), (ref new 2)。另外, 下面的ref 3–7你可以先忽略不必看。—————————- 恭喜小丸子、Ingrid得獎!!也謝謝小夏、小嬿的努力，我們和knicks一樣→work as a team，個人獲獎就是整個team的榮耀! 所以請客這種事就是老闆出錢、夥計們出力就對了! 往下大家(包括FYC)的目標調整如下: 1. 要present的圖，包括平日lab meeting均要run一下統計。 2. EBV related: (a) Infection of NP460hTert with Akata-GFP EBV (ref 1, ref 2) (b) Rta-mediated genome organization (ref 3, ref 4, ref 5, ref 6, ref 7)。3. Oral cancer related : (a)
03/28 Lab Meeting- 小夏
目前的工作: To determine the DDR1 mutations in 7 OSCC cell lines. Note:The external gene-specific primers and internal M13-appended PCR primers for activation loops and JM domain (Ref.1)(Ref.2) 這兩篇的mutation都與drug的sensitivity有關。 我稍微追了一下Ref.2: Cancer Cell 2005這篇以High-throughput DNA resequencing 在164 polycythemia vera病人當中的121位有 JAK2V617F missense mutation，其中41位homozygous mutation; 80位 heterozygous mutation。Homozygous mutations來自於mutation allele的duplication。這篇的貢獻在於Inhibition of the JAK2V617F kinase with a small molecule inhibitor
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2012/2/1 Lab Meeting- 小夏
1. 計數TW05TetLuc/ER dox treat 1, 2, 3, 5, 6, 8天的細胞數。2. 以467確認Rta expression pattern 在TW01TetER及TW05TetER不同。 Rta expression level by WB: #19 ≧#16＞TW05TetER。 將再確認p21, c-Myc, p53……的表現。3. 準備HEK293, DOK, HSC3, SCC15, OECM1的genomic DNA來確認DDR1的mutation位點。4.準備HEK293, DOK, HSC3, SCC15, OECM1的cDNA來確認DDR1的isoform。
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12/7 Lab Meeting- 小夏
1. 計數TW05TetER dox treat 1, 2, 3, 4天的細胞數(mix well, to count 3 times)及WST-1 activity沒有差異。建議一樣的條件只做LD與ED組別計數3天後的細胞數及測量WST-1 activity。2. TW05TetER “escapee” 的實驗，設計失敗。3. Flag抗體建議以Cell Signalling抗體來降低背景值，Rta的訊號(或雜band)用467抗體來證實。4.在TW05TetER，dox移除後，ER會隨著時間degrate，其程度與Luc相同，24小時已degrate超過一半; 若dox一直存在下，在96小時前ER的表現也都還會在。至於ER隨著時間增加而增加減少或者是持平，將會繼續釐清，將ER的Kinetics確定清楚。5. TW05EREV的9株clones以Q-PCR來看viral partical的產生，#1, #4. #7有少量particle，#2, 3, 5, 6, 8, 9則沒有偵測到particle的產生。以WB來看#1, #4. #7 lytic protein的表現Zta: 7>1>4, gp350/220: 1, 7 >4; 隨著dox的induction, #1, #4, #7 的cellular protein p63皆下降，p53皆上升。
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10/12 Lab Meeting- 小夏
1. TW05TetER的doubling time為22.5hr，與TW05TetLuc差不多，繼續持續觀察。將計數long-time treatment的細胞數(mix well, to count 3 times)及WST-1 activity。2. 設計TW05TetER做 “escape” 的實驗。3. The expression kinetics and stability of EBV Rta inTW05Tet cellsa. 在12-96hrs之間看不出kinetics，首先將找出Flag抗體的最佳條件，將Flag-ER壓出。b. Dox induce 24hr之後wash off之後看12hr至72hr protein的degradation，結果Rta確實隨著時間degradate，但預設應該沒有變化的Luc72hr 卻也detect不到任何訊號，猜測也許是沒有加到dox(?)，將另一批sample lysis來確認這件事情。4. Establishment of TW05EREV目前有9株clones，1號細胞株先以Dox或TS induce 48hr以IFA看viral protein的分布比例; 及Q-PCR來偵測viral partical。IFA結果 Flag-Rta每一顆細胞都有，Q-PCR結果viral partical 偵測不到。未來screen clones看induction time 為72hr之後，先以Q-PCR來看viral partical是否有出來為主。
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09/07 Lab Meeting- 小夏
A. Whether serum is required for Rta-induced senescent phenotype in TW05tetER1. 找出positive control沒有出來的原因。2. 在一直serum free的情況下，dox-induction若有差別，才可以說明serum的重要性。3. SA-beta-gal stain在9天有部分細胞是negative，像Escapee的細胞，也許時間要抓早一點來減少這些細胞的比率。B. 接著先完成以下:To figure out the expression kinetics and stability of EBV Rta inTW05Tet cellsTW05TetER的doubling time，生長曲線。
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