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2011
05/11 Lab Meeting- 小夏
報告：1. The expression kinetics (0-72 h) of cell cycle regulators and viral immediate-early proteins in Dox-treated TW01EREV-2716. (Rta, EAD, p53, SFN)2. The cytotoxicity of U0126 on TW01EREV-2716: 72hr, IC50=45.76uM3. Pretreat 20uM U0126 1hr before dox treatment can inhibit activation of MAPK (ERK 1/2), but don’t inhibit EBV reaction in 2716.討論：首先先釐清1. Cell density與cell growth/senescence/death以及 viral reactivation有關2.
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05/03 Lab Meeting-小嬿
1. 比較Dox- 和TPA/NaB-treated TW01-EREV-26(ER-high)/2716(ER-medium):a. the amount of spontaneous lytic and the responses to inducers: 2716 > 26b. Dox在2716的反應比TS佳, 但在26的反應比TS差c. 未比較protein expression level2. 比較Dox-treated TW01-EREV-26/2716(0-6天):a. viral proteins: Flag-Rta/total Rta與之前結果相同: 26>2716; BZLF1, BMRF, BLLF1在兩細胞株都以類似EREV8的cascade pattern出現, 但表現量2716>26; latent protein, EBNA1在Dox處理後也有稍稍增多的現象, 2716較為明顯b. viral particles: 24小時未有病毒量的變化, 48小時開始induce出病毒, 26細胞株所產病毒量約在5-10x 10^4/ml, 而2716的72小時約為10^6/ml, 72-144小時的病毒量相差不大c. cell death associated markers: 目前試了caspase-3及PARP-1. caspase-3的cleavage form在26較多, 但在induce 3天之後便減少(in
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4/27 Lab Meeting-ingrid
(1) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質的確有減少，A1效果比D1好。shLuc的lysates中，OGT的表現隨著時間增加而增加(?)(但Tubulin也隨之增加?)。 (2) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，48小時後加Dox，再48小時收lysates進行WB確認，因結果難以得出結論，故重新hybridize with OGT Ab。 (3)以shLuc、shMGEA5、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24小時後加Dox，再72小時收lysates進行WB確認，似乎引起的lytic reactivation沒有差異或看不出關聯性(與之前做的結果不一樣)。
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How to write a lot
別人的看法:Donna (兩篇):http://porquoipas.blogspot.com/2007/11/how-to-write-lot.htmlhttp://porquoipas.blogspot.com/2007/11/my-always-viewable-writing-planner.html Rene Perelmutter (就是看了他的comment之後買的)http://www.amazon.com/gp/cdp/member-reviews/A6GGIUYFWUO4N/ref=cm_pdp_rev_more?ie=UTF8&sort_by=MostRecentReview#R73GZZKA8BSEW
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20110420 Lab meeting-蔡小丸
1. 利用 Nu-PAGE gel跑出的IP結果不佳2. 整理K-RTA 磷酸化paper投稿至JV後reviewers的意見3. 結果發現CDK9會磷酸化K-RTA 而 S634/S636是可能的位點 但是加入DRB 不會影響K-RTA的分子量 期望能找到合理的解釋4. 大量表達Pin1會造成K-RTA蛋白量降低 而Pin1 inhibitor與 shPin1似乎也會影響K-RTA的表達 量 因此Pin1對於K-RTA stability的影響 需要進一步探討 才能定論(不知道是否因為Pin1 inhibitor或shPin1影響polII的activity呢?)
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04/13 Lab Meeting- 小夏
To test the effect of U0126 on EBV Rta-induced EBV reactivation on TW01EREV-2716 1. 初步結果72hr 20uM U0126死了一半的細胞 (WST-1 assay) 2. 感覺Dox 48小時活細胞有隨著U0126濃度的增加而增加 3. Dox 72小時細胞全部懸浮於medium，感覺72小時Dox作用效果遠大於U0126。(這樣可以說U0126是擋不住ER的Function? 也許可以像學姊早上說的降低Dox的量) Next work will 1. Determine the cytotoxicity of U0126 on TW01EREV-2716 by WST-1 assay. 2. Confirm the expression kinetics (0-72hrs) of cell cycle regulators and viral proteins in Dox-treated
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