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#1由 EVKVLIN 在 二, 05/12/2015 – 15:07 發表。
2014/05/20 IFA assay for p-gH2AX(S139) in dox-treated 293TetERAE703 Immunofluorescence assay for p-gH2AX(S139) in dox-treated 293TetER
5/6 Seed 1X10^5/6-well in 22mmx22mm coverslip
5/7 add Dox50ng/ml 5days
5/12 Immunofluorescence assay
–> Fix with
A. 100% iced MeOH -20degreeC 5min (3片NC,3片Dox)
B. 2% paraformaldehyde RT10min (2片NC,2片Dox)
==> to test the fix condition (AE702)
5/15
Fixed with 2% paraformaldehyde in PBS for 10min at room temperature, and permeabilized with 0.1%Triton X-100 for 5min at room temperature (3片NC,3片Dox)
p-gH2AX(S139)1:500 4degreeC O/N
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#2由 EVKVLIN 在 二, 05/12/2015 – 15:05 發表。
2014/05/05 IFA assay for HP1gamma in dox-treated 293TetERAE700 試試 HP1gamma IFA的條件(1:400 to 1:200)
seed 293TetER 1X105/well in 6-well plate
treated with dox for 5 days
IFA: Fix with 100% iced MeOH -20degreeC 5 min
 結果一抗1:200仍然很弱，考慮下次1:50。
由AE702結果看起來，2% paraformaldehyde RT10-15min固定條件下，細胞樣子較漂亮。
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#3由 EVKVLIN 在 二, 05/12/2015 – 15:01 發表。
2014/08/05 Immunohistochemistry of FGFR3Slide 1
 Slide 2
 Slide 3
 Antigen retrieval在ph9的條件下，染在的位置大部分在細胞質(如箭頭所示)，而pH6的條件下，FGFR3染到的位置主要在細胞核。
Slide 4
 Slide 5
 Slids 6
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#4由 EVKVLIN 在 二, 05/12/2015 – 14:57 發表。
2014/4/9 SAHF staining by DAPIAE370 SA-b-Gal staining of old OKB2 cells
養著養著越來越變大的OKB2真的老掉了嗎? 結果8成以上細胞為SA-b-Gal positive staining。
AE371 SA-b-Gal and DAPI staining of NP460_hTERT cells in KSFM or DFK medium
將NP460hTERT養在KSFM或DFK medium一週，染SA-b-Gal為negative，同時試試看DAPI可以在同一個WELL中覆染嗎? 結果顯示可以同時染DAPI。
AE379 SA-b-Gal and DAPI staining of old OKB2 cells
將YMH不要的old OKB2同時染SA-b-Gal與DAPI，想看看是否老化的細胞就有punctate DNA foci的現象(參考文獻)，結果顯示大部分細胞並沒有punctate DNA foci。
討論
1.在coverslips染色會看得更清楚;
2.拍照要注意將對比呈現得更好;
3:先試試單純DAPI的staining，排除不同固定方式或SA-b-Gal的干擾。
AE372 SA-b-Gal and DAPI staining of dox-treated 293TetER
試著要將dox-treated 293TetER同時染SA-b-Gal與DAPI，想看看是否EBV Rta誘導的老化細胞就有punctate DNA foci的現象，結果顯示大部分細胞並沒有punctate DNA foci。
另外，DAPI staining觀察到的現象為: dox-treated 293TetER之細胞核形狀變不規則，有些許細胞核變大，甚至有兩倍大的差距。
討論
1.再改善一下DAPI條件試試看，先試試單純DAPI的staining;
2.細胞數可以再降(細胞數:5x10^4-2×10^5，此次用2×10^5);
3.試試染其他已被報導與老化相關之marker。
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#5由 EVKVLIN 在 二, 05/12/2015 – 09:27 發表。
2014/8/28 FGFR2 antibody for IHCIHC目前想先測試這兩支，會再多看其他有用這兩隻作IHC的paper。
(由於先前有與abcam原廠客訴FGFR3抗體不可以用，所以可以換一隻新的其他的抗體，這次應該可以換這支FGFR2抗體來試試)
 下面是一些datasheet上Western的圖與建議的positive cell line
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#6由 natsumi 在 五, 03/27/2015 – 10:46 發表。
AE734_Protocol and related products of AE733Protocol
  Related Products  |
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#7由 natsumi 在 一, 01/12/2015 – 10:58 發表。
AE710/AE717 Western blotting of abcam ab10651 anti-FGFR3 Ab Dear 玉蓮,
原廠回覆希望您可以修改一下protocol應該結果就會比較好:
1.
Change the blocking agent from milk to BSA. Block the membrane with 5% BSA in TBST for 1hr at RT
2.
Use 5% BSA in TBST as antibody diluent
3.
Run a “no primary” control to check whether the non-specific binding is from secondary antibody or not
如果跑出來結果還是一樣不好, 原廠會退錢喔!!
依照廠商要求再做一次Western
 結果廠商答應可換同價格抗體一隻。
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#8由 natsumi 在 一, 01/12/2015 – 10:48 發表。
AE716 IHC of FGFR3 in OR2081 and BL2081         |
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#9由 natsumi 在 三, 01/07/2015 – 16:41 發表。
AE715 IHC of FGFR3 (B9:sc13121) in C9 and TW2.6承接AE714結果想改善Santa Cruz(B9:sc13121)IHC之條件。參考Int. J. Dev. Biol. 57: 141-151 (2013)使用TEG Buffer作為retrival的條件。
另外，此次實驗改善background方法: 一抗作用前以0.1%BSA/PBS blocking0.5-1小時，並將一抗放在PBST改為PBS，來降低background。
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