https://www.addgene.org/CRISPR/
Addgene最近在賣的一系列有趣的plasmid
(addgene的另外意思就是 不貴)
目的是辨識特定DNA序列，去切斷、造成Nick、抑制基因表現或是促進基因表現。
最早能辨識DNA序列的 是Zinc finger，後來出現TALEN，這兩個都是protein為主的數位編碼。
後來又有人發現CRISPR/Cas系統
CRISPR/Cas9本來是用在抵禦外來DNA，辨識序列、切斷。
整個原理
簡單的說 Cas9會利用guide RNA (特定序列+一個二級結構的RNA)去辨識DNA序列
再將雙股DNA切斷 (去防禦外來DNA入侵)
一開始被利用其實是拿來做transgene ES，增加DNA recombination 的效率。
這幾年陸續有人將enzyme activty移除，甚至做成fusion protein，
接上抑制性domain HP1/KABP)或是活化domain (VP64)，去專一性的抑制或表現特定基因。
跟Zinc finger跟TALEN比起來，其辨識主要是gRNA 序列而不是protein的排列順序(編碼)
所以可以利用合成oligo-nucletides insert 到gRNA expression plasmid去達成鑑別力，
整個彈性、速度跟CP值，完全大勝前兩項。
CRISPR抑制 (CRISPRi)也可以媲美RNAi，甚至更好。
我看其中一篇reference，他們做CRISPRi後去做Sequence，
發現專一性極高，也無off-target effect。(paper data都是最漂亮的! 哈)
然後合成DNA primer的價錢，也遠比RNA 便宜很多，所以CP值跟彈性都更高。
activation部分，也可以去操作特定基因﹐的表現。
可以用來證明某些未知的transcript 是來自於同一個還是獨立的。
其實在Zinc finger/TALEN的部分，
也是有人將epigentic enzyme，DNMT, PRC Complex or Tet去做fusion，
去達成特地區域的epigentic change。
CRISPR應該也可以做到。
以上資訊分享給大家囉。(就當作我journal club的報告吧!!超敷衍!! 哈)