這部份實驗是承接293TetER之後的故事,我希望剛開始的一些結果可以當做小嬿的論文。小蓮請先協助,小丸子與Ingrid在忙完KR後也要漸漸加進來,希望能夠把這部份的因果關係釐清清楚。以EREV8而言雖然和293TetER所表現flag-ER的量是相似的,但是因有病毒基因套在裡面,所以估計還不到SA-b-Gal最強的第十天,細胞可能因病毒大量製造的摧殘就掛了。ERKV可能也是如此。所以,我們要弄清楚什麼呢?
⓵Dox-treated 293TetER停在G1,那有病毒的細胞呢?
⓶Dox-treated 293TetER在serum-free這個stress存在下細胞巨觀並未如對照組產生顯著變化,而且病毒再活化時,在48小時以後細胞明顯變圓。再來,microarray顯示Rta或Rta+EBV或Rta+KSHV均會讓一群控制細胞架構的基因表現異常。另外,小龜的結果又顯示ER一表現可持續活化Erk(一個和cytoskeleton有密切關連的分子),這些線索之間相互間的關係到底是什麼?
⓷Dox-treated EREV8和ERKV有走完裂解期嗎?製造出來的病毒有感染力嗎?效價好嗎?(小嬿你真的要準備吃大餐了)
⓸另外幾組異常表現的基因如DUB/protease,chromosome binding protein等,如何和老化及病毒再活化連起來呢?
⓹細胞老化已知的pathway(growth arrest, activation of mTOR, secretion of mitogenic/antiapoptotic factor, activation of proteosome)可提供病毒什麼好處、讓它引發lytic cycle?
4 thoughts on “細胞老化和病毒再活化”
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小嬿你覺得利用過年期間做一個這樣的實驗怎麼樣:仿老師們建議去transform PBMC (Gosh, it takes four weeks!這裡)的實驗,但是我們利用G418(Akata)或hygromycin(Maxi)的抗藥性做在293上。就是說類似這次做法把infection(24-well~0.5-ml cell)做完後的細胞,稀釋到含藥(maintain時的雙倍濃度)的150-mm盤子裡。如果它們是真貨的話,會被留下來產生colony.過了完年後我們也有了immortaized-HEK293 cells⁈
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學姊提供的protocol只需要11.5 ml的血ㄋㄧㄚˇ ㄋㄧㄚ~
誠徵血牛!!!
請你把我當血牛,鎮靜地扎下去、一針見血。拜託拜託。