AC384
2/17/2011
Thaw HCC-70, HCC-2218, MDA-MB 134-VI, 157-VII, -361, -453。
2/18/2011 change medium
2//23/2011 cell count and sub-culture
- HCC-70: Total: 4 x 10∧5/ml*10-ml = 4x 10∧6 (1.3 M for T25, 2.7 M for p-10)
- HCC-2218: Total: 1.35 x 10∧5/ml*25-ml = 3.3x 10∧6 (1.1 M for T25, 2.2 M for p-10)
- MDA-MB134-VI: Total: 4.8x 10∧5/ml*9.5-ml = 4.8x 10∧6 (1.6 M for T25, 3.2 M for p-10)
- MDA-MB361: Total: 1.3x 10∧6/ml*9-ml = 1.1x 10∧7 (1 M for T25, 2 M for p-10)
- MDA-MB453: Total: 2.8x 10∧6/ml*10-ml = 2.8x 10∧7 (1 M for T25, 2 M for p-10)
2/24/2011
Dear 凌君: 這五株細胞先給你們, 如果星期五下班前還不到50% confluence, 則可以換一下medium,讓它們到下週二再passage. 如果有時間的話，也可以在週五都把它們transfer到十公分盤,那就更高枕無憂了。其中suspension那一株細胞(HCC-2218)，我會養成大約1.5 x 10∧5/ml，所以用T-25可能較好。又HCC-70剛解時有許多的細渣渣，現在還是有，不過已經好很多了。因為我們不是養BrCA專家，所以不知道細渣渣是這株細胞的特性、還是當初沒有凍好造成許多dead cell debris 的關係。養幾代後看會不會乾淨一點。其他有渣渣的細胞也都依此類推。
凍細胞時，我們一律是 3 x 10∧6/ml/viral。1X freezing medium = culture medium + 7.5% sterile DMSO. 為了操作方便，我們會先配一瓶 2X freezing medium (= culture medium + 15% DMSO). 讓它在冰箱中pre-cool. 離心下來的細胞先輕輕拍散，然後resuspend在1/2體積的culture medium中，之後再慢慢加入1/2體積的pre-cooled 2X freezing medium, mix, 然後再分裝至標示好的冷凍管中。例如:
- 妳離了9 x 10∧6細胞(1,500 rpm, 5 min)，預計凍3管。
- 輕輕拍散cell pellet、並加入1.5-ml culture medium來均勻混合這些細胞。
- 取出1.5-ml 2X freezing medium, 然後慢慢加到cell suspension中，上下pipette幾下使其混合均勻，然後aliquot 1-ml to each vial。