Dual Luciferase assay: 所以,測試結果簡述如下. (1) Internal control: pFA-GAL4 系列因KRTA/TA在40ng/well/24-well plate含有約1K~2K的內生性renilla luciferase活性,所以最後選擇以活性最高的pEF1-RL為internal control. pLenti-Flag系列因pEF1-RL在不同activator:reporter比例被活化的程度不一, 所以選擇以variaion較少的pTK-RL或pTK-hRL為internal control. (3)(叮嚀:日後碰到)
Maruko:全長KR之DLR以TK-RL或TK-hRL作為internal control均可(SV40-RL會KR抑制及EF1-RL則被瘋狂活化);IP進行中;latency disruption籌劃中.小嬿:（1)之前結果顯示EBV Z對SV40 promoter會有二倍活化,對TK-RL(or) TK-hRL有4~5倍活化.所以在以SV40-RL為internal control下,證實gZ,cZ可活化BHLF1-Luc,tZ is non-functional.(2)以electroporation方法證實gZ,cZ可活化p3HR1中EAD,但是endogenous Z好像沒出來. (3)293TetgZ(3 clones), 293TetcZ(2 clones), and 293TettZ(>3clones)持續screening中.(4)下星期被吩咐要報RNA pol II pausing的paper. 建議實驗:(1)EBV Rta與Zta的transient-transfection實驗,仿小丸子和YCK上週做的2:1, 1:1, 1:5, 1:11條件,看看EBV Rta與Zta對其direct-binding promoter之behaviour是否相似?(2)P3HR1那一組blots,雖亂,考慮檢查endogenous Rta是否有被叫出?(用NTU ascites那一管)
Ingrid:Protein purification進行中;DLR western blot analysis 進行中;pFA-GAL4活性測試條件決定,其中366AA絲毫不差地repeat了PWW結果,366EE亦上升,暗示OGlcNAc修飾會壓低TA活性.全長,表現量與latency disruption待測.
小蓮:(待續)