Sample ID (182240):
A(Luc48)B(Luc24off24）Luc小丸子
C(ER48) D(ER24off24) ER小蓮 (p11)
E(KR48) F(KR24off24) KR小丸子(p4)G(EV48) H(EV24off2) EV小嬿I(KV48) J(KV24off24) KV小蓮 (p8)
各細胞maintain者在星期五種三個10公分盤(2.5~3M),
隔週週一,每種細胞seed兩個6孔盤(0.5M/well)培養在不含藥的tet-free medium中。
週二全部加dox。
週三取一盤6孔盤做wash-off步驟。
週四收細胞(五格for RNA,一格for protein)。
小丸子負責三個重複中的第一組,Ingrid負責三個重複中的第二組,小蓮負責三個重複中的第三組。
哪一組細胞送抽RNA做microarray呢?把30個protein sample先抽好做flag,p21,KbZIP, EA-D等測試,看induction及wash-off情形再定。因為要抽RNA,所以所有細胞harvest下來後均勻拍散,全部先放進-80C冰箱待用。5M細胞約可抽出50ug RNA,而我們的需要量是3~5ug左右。
——————————————————————————————–
2008/10/16 SFL wrote:
Purpose: To analyze transcriptome changes modulated by R. (餘略)