5/25 Lab Meeting-ingrid
(1) 以shLuc、shOGT、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (6×10^5/2ml/well/6well*6) 中,48小時後加Dox,再48小時收lysates進行WB確認,發現shOGT-A1及shMGEA5-B2皆比shLuc引起更多的lytic reactivation。且送入shOGT的細胞樣本中,除了OGT蛋白質減少,MGEA5蛋白質也減少,送入shMGEA5的細胞樣本中,除了MGEA5蛋白質減少,OGT蛋白質也減少。重複之前收集的2次實驗樣本,也得到一樣的結果。進行Q-PCR檢查送入shOGT的細胞樣本中,MGEA5的mRNA是否有減少,避免shRNA有認錯目標的效用。且用IP將KR抓下,用WB來確認O-GlcNAc變化程度。 (2) 將TW05TetER的#7+9+10+12 (Flag Positive ratio=87~-96%) pool成一個clone。(3) 重新建立TW01TetLuc及TW05TetLuc,目前正在用Zeocin篩選clones。(4) TW05TetER/gZ有28clones進行WB篩選,Rta alone、gZ alone和Rta+gZ皆有篩出,接下來進行IFA確認。
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