5/25 Lab Meeting-ingrid

(1) 以shLuc、shOGT、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (6×10^5/2ml/well/6well*6) 中,48小時後加Dox,再48小時收lysates進行WB確認,發現shOGT-A1及shMGEA5-B2皆比shLuc引起更多的lytic reactivation。且送入shOGT的細胞樣本中,除了OGT蛋白質減少,MGEA5蛋白質也減少,送入shMGEA5的細胞樣本中,除了MGEA5蛋白質減少,OGT蛋白質也減少。重複之前收集的2次實驗樣本,也得到一樣的結果。進行Q-PCR檢查送入shOGT的細胞樣本中,MGEA5的mRNA是否有減少,避免shRNA有認錯目標的效用。且用IP將KR抓下,用WB來確認O-GlcNAc變化程度。 (2) 將TW05TetER的#7+9+10+12 (Flag Positive ratio=87~-96%) pool成一個clone。(3) 重新建立TW01TetLuc及TW05TetLuc,目前正在用Zeocin篩選clones。(4) TW05TetER/gZ有28clones進行WB篩選,Rta alone、gZ alone和Rta+gZ皆有篩出,接下來進行IFA確認。

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05/18 Lab meeting-蔡小丸

1. 利用黃老師家學姊提供之unknown cancer tissue sample進行DDR1之IHC練習2. 試著釐清Pin1對於K-RTA蛋白質穩定性的角色及對於K-RTA transactivation ability的影響~~但結論仍在一片渾沌中~~3. DNCDK9對於K-RTA transactivation ability有抑制的效果 但仍不能排除 DNCDK9是全面性抑制了transcription

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新搭法

高鐵 625台北 9:00 新竹 9:31 新竹高鐵站橘線接駁車9:50 (~25min至生活科技館) 生活科技館紫線10:30 (~25min至NHRI)

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05/11 Lab Meeting- 小夏

報告:1. The expression kinetics (0-72 h) of cell cycle regulators and viral immediate-early proteins in Dox-treated TW01EREV-2716. (Rta, EAD, p53, SFN)2. The cytotoxicity of U0126 on TW01EREV-2716: 72hr, IC50=45.76uM3. Pretreat 20uM U0126 1hr before dox treatment can inhibit activation of MAPK (ERK 1/2), but don’t inhibit EBV reaction in 2716.討論:首先先釐清1. Cell density與cell growth/senescence/death以及 viral reactivation有關2.

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05/03 Lab Meeting-小嬿

1. 比較Dox- 和TPA/NaB-treated TW01-EREV-26(ER-high)/2716(ER-medium):a. the amount of spontaneous lytic and the responses to inducers: 2716 > 26b. Dox在2716的反應比TS佳, 但在26的反應比TS差c. 未比較protein expression level2. 比較Dox-treated TW01-EREV-26/2716(0-6天):a. viral proteins: Flag-Rta/total Rta與之前結果相同: 26>2716; BZLF1, BMRF, BLLF1在兩細胞株都以類似EREV8的cascade pattern出現, 但表現量2716>26; latent protein, EBNA1在Dox處理後也有稍稍增多的現象, 2716較為明顯b. viral particles: 24小時未有病毒量的變化, 48小時開始induce出病毒, 26細胞株所產病毒量約在5-10x 10^4/ml, 而2716的72小時約為10^6/ml, 72-144小時的病毒量相差不大c. cell death associated markers: 目前試了caspase-3及PARP-1. caspase-3的cleavage form在26較多, 但在induce 3天之後便減少(in

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4/27 Lab Meeting-ingrid

(1) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中,24、48、72小時後,收lysates進行WB確認目標蛋白質的確有減少,A1效果比D1好。shLuc的lysates中,OGT的表現隨著時間增加而增加(?)(但Tubulin也隨之增加?)。 (2) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中,48小時後加Dox,再48小時收lysates進行WB確認,因結果難以得出結論,故重新hybridize with OGT Ab。 (3)以shLuc、shMGEA5、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中,24小時後加Dox,再72小時收lysates進行WB確認,似乎引起的lytic reactivation沒有差異或看不出關聯性(與之前做的結果不一樣)。

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How to write a lot

別人的看法:Donna (兩篇):http://porquoipas.blogspot.com/2007/11/how-to-write-lot.htmlhttp://porquoipas.blogspot.com/2007/11/my-always-viewable-writing-planner.html Rene Perelmutter (就是看了他的comment之後買的)http://www.amazon.com/gp/cdp/member-reviews/A6GGIUYFWUO4N/ref=cm_pdp_rev_more?ie=UTF8&sort_by=MostRecentReview#R73GZZKA8BSEW

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