(1) 用IP將KR抓下,用WB(RL2)來確認O-GlcNAc變化程度;經更改IP流程,可以有效率以KR(660) from ICON將KR抓下(ERKV_Dox48h),但是之後應用於ERKV_shLuc_Dox48h、ERKV_shOGTA1_Dox48h及ERKV_shMGEA5B2_Dox48h,卻效率不佳,以致於後來的RL2及PARP1皆無法辨認。目前持續改進IP流程中。Note:如果是要看KR蛋白質,建議Lysis buffer要加phosphotase inhibitor以避免KR的碎裂。
(2) 關於進行shRNA的Q-PCR,已完成實驗數據。但是分析時,應注意星號的標誌,正確為*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001(星號應水平標誌)。 (3) 經由計算細胞生長速率及考慮表現Luc蛋白質的程度,混合細胞得到TW01TetLuc pool :#2+ #8及TW05TetLuc pool:#1+ #3+ #5。 (4) 三種Flag Ab測試(Sigma F1804舊、Cell Signaling及Sigma F1804新):認識Luc蛋白質在TW01TetLuc pool及TW05TetLuc pool的titer皆差不多,除了Cell Signaling背景比較髒。