1.製備以下表現質體以供濁水溪公司代製兔子多株抗體
(1) pGEXHis_cZ :已分裝保存於-80℃冰箱。可用於WB(1:2000)(萍)、IFA(1:2000)(鏸)及免疫組織染色 (1:1000)(鏸)。
(2) pGEXHis_ER_Q320stop and pGEXHis_ER_L550stop : Q320stop已送給濁水溪代製。另外構築pGEXHis_ER_277E-516V做蛋白質表達。
(3) pGEXHis_KR_E600stop and pGEXHis_KR_Q658stop :蛋白質表現量太少(失敗)。
(4) pGEXHis_BALF3 :蛋白質表現量太少(失敗)。
2.使用EGFP當目標基因來測試建立NP460TetR_ER inducible cell lines的條件:用未稀釋的lentivirus病毒液直接感染6小時後移除,細胞發綠光比例接近100%,之後細胞放大後,使用10 ug/ml zeocin作篩選16天,發現未加Dox與有加Dox的綠光比例類似,建議做WB(flag)作確認。
3.萍使用Mini-PROTEAN II multiscreen apparatus (Bio-rad)來進行抗體最佳稀釋倍數的實驗。相關資料在https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/f9ec3085-b590-44c6-9b36-b36876cad466/Mini-PROTEAN_II_Multiscreen_Apparatus
首先置備只有一個well的膠體,樣品量為單一well*20=200ug (萍通常使用量),轉漬完的NC膜置於裝置內,略將裝置傾斜後,從下面的孔注入600ul抗體稀釋液(避免氣泡),室溫靜置2小時後,以Tip移除抗體稀釋液,用TBST清洗3次後,將裝置打開把NC膜拿出,進行後續二抗的雜交實驗。