1. 計數TW05TetER dox treat 1, 2, 3, 4天的細胞數(mix well, to count 3 times)及WST-1 activity沒有差異。建議一樣的條件只做LD與ED組別計數3天後的細胞數及測量WST-1 activity。
2. TW05TetER “escapee” 的實驗，設計失敗。
3. Flag抗體建議以Cell Signalling抗體來降低背景值，Rta的訊號(或雜band)用467抗體來證實。
4.在TW05TetER，dox移除後，ER會隨著時間degrate，其程度與Luc相同，24小時已degrate超過一半; 若dox一直存在下，在96小時前ER的表現也都還會在。至於ER隨著時間增加而增加減少或者是持平，將會繼續釐清，將ER的Kinetics確定清楚。
5. TW05EREV的9株clones以Q-PCR來看viral partical的產生，#1, #4. #7有少量particle，#2, 3, 5, 6, 8, 9則沒有偵測到particle的產生。以WB來看#1, #4. #7 lytic protein的表現Zta: 7>1>4, gp350/220: 1, 7 >4; 隨著dox的induction, #1, #4, #7 的cellular protein p63皆下降，p53皆上升。
3 thoughts on “12/7 Lab Meeting- 小夏”
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ps:1.剛好兩張films沒有標好marker被抓包…
2.以後看morphology的差異要看更高倍數。
Yeah, 加油~ 另外我們需要一張Rta表現比量圖:現在我們知道TW01及TW05對Dox induced protein的代謝速度不同，所以若以總量，尤其是以467染出來overwhelmed的總量來比較它們是很不公平的…
有哪幾張結果可以顯示Rta在TW01#16, #19以及TW05 (pool clone)這三株細胞中的差異為何？也就是說Dox induce時間相同，internal control 類似，然後antibody沒有過染。同理，TW01Luc及TW05Luc也需要比較一下。這些分析看起來很繁瑣，可是非做不可，基礎打穩了之後，才不會造出一棟棟的空中樓閣來，華而不實、徒費時間…