1/5 Lab Meeting-ingrid

製備以下表現質體以供濁水溪公司代製兔子多株抗體 (全部已clone成功)
(1) pGEXHis_cZ :已送出代製抗體。
(2) pGEXHis_ER_Q320stop and pGEXHis_ER_L550stop
(3) pGEXHis_KR_E600stop and pGEXHis_KR_Q658stop
(4) pGEXHis_BALF3
(2)(3)(4)除pGEXHis_ER_L550stop尚未表現,其餘在BL21表達蛋白質皆不明顯增多,且皆比預測值大約6-8kDa。
目前採取的策略如下
(1) 使用未開封的LB/BHI或跟其他實驗室要一點LB來做control
(2) 表現蛋白質時,Amp濃度提高至200ug/ml,IPTG濃度降至0.1或0.5mM,加IPTG前應養約3-5小時直到OD600=0.6,同時使用DH5α作表現。
(3) 做BL21及DH5α的competent cell
林同學的論文中提及她用的ER1-320中(Dr. Miller提供,疑是B95-8 strain)很多Arg皆已被突變掉,包括Arg83、86、88、89及90,在我們MABA strain,這些位置皆是Arg。另外根據PWW的紀錄,二者的核酸序列有10個不同處,但只有2個amino acid不同。

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