08/10 Lab Meeting- 小夏

1. 在TW01TetERTW05TetER上Serum starvation的條件: 6-well種50000-100000 incubate 48h,serum free組與complete medium組相比,serum free組細胞數少,細胞長得細細長長,在細胞數與細胞型態上有差異性。

補充:根據之前flow data (call cycle analysis) 看48小時的實驗,細胞6-well種100000不至於過滿,200000細胞會過滿。所以我偏愛100000 incubate 48h的condition。接著模仿MB教授的實驗方法看看serum (glucose順道一起看)對Rta-induced cellular senescence.的重要性。(Ref

2. Establishment of TW05-EREV

結果:

(1) PEG濃縮病毒可以提高virus infection的效率(5%至20%, combine TGFbeta可達到30%),而TGFbeta則效果不彰。

(2) 細胞先放大至6-cm dish,再種1000顆細胞至10 cm dish進行G418 selection的過程中細胞便死光。

討論:

從12-well放大不要一下就放到6-cm dish中,建議先至6-well較適當。而G418 selection的步驟應該要在細胞放大時就做,防止沒有病毒的細胞勢力擴大。

若現在手邊的細胞已經沒有綠光的存在了,便重新開始以濃縮病毒的方式感染細胞。

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