(1) 用IP將KR抓下,用WB(RL2)來確認O-GlcNAc變化程度;結果是可以成功以KR(660) from ICON將KR抓下,但是效率不佳,以致於後來的RL2及PARP1皆無法辨認。接下來會以重收細胞(以EBC Buffer溶解細胞)、增加cell lysate或KR(660)的量來改進IP效率。NOTE:以6% SDS-PAGE分析;KR(Ueda)會認到2條band?
(2) 進行Q-PCR檢查送入shOGT的293FT細胞樣本中,MGEA5的mRNA是否有減少,反之亦然。結果發現ACTIN primer會影響,但GAPDH不會影響。經重複實驗,排除off-target作用。
(3) TW01TetLuc有4株clones及TW05TetLuc有4株clones進行WB (Flag Ab) 確認為positive。接著進行計數細胞,將生長速率差不多的細胞混合。NOTE:Flag Ab是否有問題?