08/03 Lab Meeting-小嬿

進度報告
1. 在HEK293分別做Flag-Luc/ER/KR/gZ的transient transfection 24hrs,
a. IP CTCF: 1/6 of IP中, WB CTCF未有band–>用5/6的memebrane check again;
5/6 of IP中看到ER (by 467), 微弱的gZ(by 4F10), 未見KR(by Yoshi’s);
b. IP Flag: 失敗! 1/20 of IP可見Flag蛋白被IP下來, 但未見CTCF!
@WHT建議二抗濃度可再做調整, 讓background更乾淨(e.g. ~100 kD的band)
@在TW01系統試試看!
@SFL建議在293FT做transfection效果更佳! (plus co-co-co-transfection!)
2. 利用ChIP分析TW01TetER_16細胞中, 在Dox induction的狀況下, CTCF所binding的DNA fragment量是否有所改變
–>依據Q-PCR結果顯示, input DNA量不穩定, 影響CTCF IP的數值計算; mock(IgG) IP所得DNA量較少, Ct值SD非常大
@SFL建議做少一點sample量, IP CTCF和Rta, 並且screen先前擬定偵測的gene

GOGOGO! 往PLoS Pathogen邁進!!!