Dual Luciferase assay: 所以,測試結果簡述如下. (1) Internal control: pFA-GAL4 系列因KRTA/TA在40ng/well/24-well plate含有約1K~2K的內生性renilla luciferase活性,所以最後選擇以活性最高的pEF1-RL為internal control. pLenti-Flag系列因pEF1-RL在不同activator:reporter比例被活化的程度不一, 所以選擇以variaion較少的pTK-RL或pTK-hRL為internal control. (3)(叮嚀:日後碰到)
9/30 Lab Meeting 心得彙整 Read More »
Widespread changes in protein synthesis induced by microRNAs / The impact ofmicroRNAs on protein output MicroRNAs可通過抑制一個信使RNA（mRNA）的轉錄或通過誘導其降解來調控基因表達。 雖然以前的研究工作已經在mRNA層面上對這種調控進行了測量，但過去對有多少調控發生在蛋白層面上仍不知道。現在，由David Bartel和Nikolaus Rajewsky領導的兩個小組，利用被稱為SILAC（全稱為“利用細胞培養中的氨基酸進行穩定同位素標記”）的方法的變通形式，對蛋白層面上所發生的蛋白組範圍內的變化作為內生和外生microRNAs的表達的一個函數進行了測量。他們發現，雖然microRNAs能直接抑制數百個基因的轉錄，但更多的間接效應卻能導致數千個基因的表達發生變化。然而，所觀察到的很多變化在數量級上不到兩倍，表明不管是直接還是間接，microRNAs都能充當“可變電阻器”，來微調蛋白合成，以便在任何一個給定的時間都能與細胞的需求相匹配。（Articles Nature 2008 SePost Optionsp-4-Vol 455:pp. 58, 64; Author page）
微RNA在蛋白層面上對基因表達的調控程度（MiRNA tunes proteins） Read More »
var link=post.link[0].href;要多加判斷行三行(case sensitive所以P不是p; 最後一筆是j,不再是0),所以改成 -var j = 0; -while (j < post.link.length && post.link[j].rel != "alternate") -j++; -var link=post.link[j].href;感恩trifire和Abin君吶!美妙的JSON,Cool~
Cancer Cell Vol 14: 146-(1) RAD001 is effective in PIN solution by day 14 after treatment ) (PTEN null or AKT tg mice). By day2, S6 ribosomal protein and eIF4G are effectively inhibited by RAD001, but the p27 is still induced and the PIN is still present. By day 14 of RAD001 treatment, however PIN
p27 checkpoint and PIN senescence Read More »
下午要把老化論文做最後定稿各位請互相幫忙彼此照顧 有訪客請留言 有急事再敲門預計六點出關! 謝謝各位的幫忙. CO2確定先向興大把這三瓶疑似瑕疵貨換回好貨(應是free吧)下次我們再向洽隆下訂單.
Dear Ingrid /CCL,可否抽點空幫忙校正這一段,就是進入各個公司,輸入編號,看看叫出來的東西和我們寫的是否一致. 下次你們的paper會換成讓小蓮及其他人幫忙校對.謝謝！ Antibodies. The sources of antibodies used in this study were variously from Meridian Life Science (Cincinnati, OH) [GAPDH (6C5)]; Cell Signaling Technology (Danvers, MA) [p15 (4822), p16 (4824), p21 (2946), p27 (2552), CCND1 (2926), CCND3 (2936), CDK4 (2906), CDK6 (3136), pRb (9309), pRb(S807/811) (9308), γH2AX(S139) (2577), p53(S15) (9284), p70S6K(9202), p70S6K(S371) (9208),
1. Preparation of GST-KR for polyclonal antibodies: protocol okay, 但把benzonase加入resuspending buffer中,而protease inhibitor放在第一次thaw完的lysate中,如果還是很黏的話要在thaw完後sonicate 15~30秒 2. 366/367EE 有抑制現象!請再repeat一次,並且加入pFA-系列,如果也是抑制： 以IP確認WT,366AA及366EE和HDAC1之interaction(we’ve bought this ab, didn’t we?) 準備做WT,366AA及366EE在293/rKSHV.219之latency disruption 3. 293/綠EBV已槓龜兩次. 4. p21/p27與老化及many others: under control! 5. 小丸子要不要考慮這個跟這個,還有一個這個. 另外S186A是一個至今仍然未解的有趣mutant. 它可以bind DNA,可以transactivate一些promoter,有被訂出in vivo是被PKC磷酸化,但似乎此位點磷酸化的有無與disrupt latency無關.所以此例子並不適合追太久.. 6.小嬿講得很清楚喔!知道已給妳太多paper了讀不完(sorry) 但是,可否,拜託,先讀一下這四頁知識,幫我們summarize 一下. 我覺得瞭解這篇以後,對往後妳和小丸子的實驗設計非常有用(才不會走錯路)因為這實在是太顛覆我過去的想法了!
9/9 Lab Meeting 心得彙整 Read More »
我想 陳老師的話 向子彈一樣 射向了SFL LAB的每一個人身上 當然 坐最前面的SFL 應該最受傷 我想 凡事要樂觀…((我常常告訴自己….)) 要化這些為助力 努力大步往前 ….別一直擔不用擔的心…這是某人告訴我的話 所以 明天又是嶄新的一天 一起加油 衝衝衝!!!! 一定可以的