ingrid

(1) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質的確有減少，A1效果比D1好。shLuc的lysates中，OGT的表現隨著時間增加而增加(?)(但Tubulin也隨之增加?)。 (2) 以shLuc、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，48小時後加Dox，再48小時收lysates進行WB確認，因結果難以得出結論，故重新hybridize with OGT Ab。 (3)以shLuc、shMGEA5、shOGT的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24小時後加Dox，再72小時收lysates進行WB確認，似乎引起的lytic reactivation沒有差異或看不出關聯性(與之前做的結果不一樣)。

(1) 以shLuc、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質的確有減少，B2效果比D2好。shLuc的lysates中，MGEA5的表現隨著時間增加而增加(?)。 (2) 以shLuc、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，48小時後加Dox，再48小時收lysates進行WB確認，MGEA5減少最多的B2，所引發的lytic reactivation越強烈。加入Dox也會引起MGEA5表現增加(?)。總之，將D2提高至1/4，再加入2個NC(有shRNA但未加Dox)，重做一次。

(1) Dox誘導型細胞株的選殖TW05TetLuc：#1-6測試中TW05TetER：#2-18的WB有認到ER，重新做IFA以確認表現蛋白質的比例及強弱TW05TetER/gZ：#1-33測試中(2) 以SK-N-SH cell、HelaTet、TW03Tet及TW05Tet lysates做OGT Ab的western analysis，用黃老師家的goat二抗，沒有認到目標蛋白質，重買OGT Ab。(3) 以shLuc、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質的確有減少，B2效果比D2好。

報告進度(1) TW05TetER：#1-18中，除了#1及#12以外，其餘在IFA中，為FLAG Ab陽性，重複做IFA(點片)以重複確認。(2) 以SK-N-SH cell lysates做OGT Ab的western analysis，覺得沒有認到目標蛋白質，再以Hela cell lysates當positive control及黃老師家的goat二抗再確認。

報告進度 (1) TW03Tet：因挑選細胞株TetR表現差，故重新挑選。TW05Tet：以#4進行接下來的穩定細胞株篩選 (#3、#4及#6送入液態氮)，包括Flag-Luc、Flag-gZ+Rta(1：3)、Flag-Rta (2)以shLuc、shOGT、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4×10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質是否有減少。 (3)以SK-N-SH cell lysates當作OGT Ab的positive control，同時確認goat二抗是否可用。

報告進度(1) TW03Tet有10株細胞株，TW05Tet有8株細胞株，已凍管且收好cell lysates等待Western analysis確認。 (2) 目前要進行的實驗如下a. 將不同稀釋倍數(0、1、1/2、1/4、1/8、1/16)的pAS-EGFP lentivirus送入293中，48小時後，計數細胞存活及死亡比率，同時跑FLOW。(這次infection時，不從細胞上移除含有polybrene的medium)b. 以shLuc、shOGT、shMGEA5的lentivirus送入ERKV中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質是否有減少。c. 將OGT Ab的條件抓好。

報告Hart新作：(1) 以chemoenzymatic assay及抗體確認histone有O-GlcNAcylation(2) 以LC MS/MS定義出histone上有被O-GlcNAc修飾的位點：Ser47 of H4、Ser36 of H2B和Thr101 of H2A(3) Heat shock(45℃，1hr)及後續的recovery的時候，發現histone的O-GlcNAc程度逐漸提升，同時OGT活性也有緩慢上升(4) 以MNase chromatin-sensitivity assays檢測發現Heat shock及後續的recovery時候，Chromatin(染色質)會condense(5) 過量表現OGT會比過量表現GFP的細胞的染色質更加condense

1. 想要測試Dox對TW01Tet的生長是否有所影響，結果失敗。下次要收短時間測試(如1、2、3天)。 2. 篩選TW03Tet及TW05Tet細胞株。TW03Tet：24株裡有19株長起來；TW05Tet：24株裡有12株長起來。目前皆放在6 well內等待Western blot測試TetR。 3. OGT抗體無法辨認抗原，已重新購買。另外要解決internal control在每個sample中的量皆不相同的問題。 4. 將shMGEA5送入ERKV細胞中，”似乎”可以使發紅光的細胞比例上升，要再進一步詳細確認。