小丸子

1. 利用黃老師家學姊提供之unknown cancer tissue sample進行DDR1之IHC練習2. 試著釐清Pin1對於K-RTA蛋白質穩定性的角色及對於K-RTA transactivation ability的影響~~但結論仍在一片渾沌中~~3. DNCDK9對於K-RTA transactivation ability有抑制的效果 但仍不能排除 DNCDK9是全面性抑制了transcription

1. 利用 Nu-PAGE gel跑出的IP結果不佳2. 整理K-RTA 磷酸化paper投稿至JV後reviewers的意見3. 結果發現CDK9會磷酸化K-RTA 而 S634/S636是可能的位點 但是加入DRB 不會影響K-RTA的分子量 期望能找到合理的解釋4. 大量表達Pin1會造成K-RTA蛋白量降低 而Pin1 inhibitor與 shPin1似乎也會影響K-RTA的表達 量 因此Pin1對於K-RTA stability的影響 需要進一步探討 才能定論(不知道是否因為Pin1 inhibitor或shPin1影響polII的activity呢?)

1. 利用coexpress Flag-K-RTA及Flag-CDK9的lysates 進行CDK9 IP實驗 結果發現K-RTA, S634A/S636A, NLSm均與CDK9有interaction, K-RTA與CDK9的association較S634A/S636A強 2. Pin1 isomerase mutant K34A與K-RTA大量共同表達 K-RTA的molecular weight並沒有改變, 初步推測 Pin1的isomerase的活性並不會影響K-RTA的molecular weight

1. 共同表達K-RTA與Pin1後發現, 大量Pin1表達會造成 K-RTA降解2. 初步結果顯示 K-RTA與 Pin1間有交互作用, 但需加入IgG控制組3. 完成silence DDR1對於口腔癌細胞株生長之影響

1. CDK9 Kinase assay結果顯示 CDK9會磷酸化K-RTA 而S634/S636是其中一個位點2. 初步看出來 K-RTA會被anti phospho-Ser/Thr-Pro MPM2所認識 而與 Pin-1間的交互作用仍需進一步證明3. 完成silence DDR1對於口腔癌細胞株生長的影響 (DOK, HSC-3, OEC-M1, SCC-15, TW2.6)

報告進度:1. 利用外送PCDNA3-Flag CDK9, PCMV-Flag2-DN-CDK9及PIRES-hrGFP-cyclin T1進行K-RTA的in vitro kinase assay, 初步看到KRTA被CDK9磷酸化,而DN-CDK9則不具有這樣的能力2. silence DDR1後對於oral cancer cells生長曲線的影響希望快快將data補起來!! 加油!!

報告英國Sahai先生兩篇collective cell migration的paper。2007年這篇是他們建立3D culture system研究squamous cell carcinoma (SCC)的collective invasion，他們發現，cancer associated fibroblast具有帶領一整群SCC invasion的能力。而cancer associated fibroblast會造成matrix remodeling及”track”的形成，以幫助SCC invasion，而這是經由integrin a3、a5、Rho-ROCK路徑。 2011這篇延續2007年的發現，進一步詳盡探討SCC的collective invasion，他們發現要發生collective invasion時，cancer cell的actomyosin (包含F-actin, phospho-MLC及MyosinⅡa)會reorganization。他們觀察到癌細胞與細胞間的actomyosin的活性都是明顯下降的，並進一步發現DDR1會參與actomyosin活性的調控，而DDR1調控collective invasion與它已知的ligand ”collagen”及它的kinase activity沒有太大的關聯性。利用GST-pull down發現DDR1會與Par3及Par6的PDZ domain形成complex，並進一步影響RhoE的分佈，而影響ROCK driven的actomyosin活性，因此，一但阻斷DDR1/Par3/Par6，SCC的collective invasion則會被中斷。本篇提供了DDR1/Par3/Par6在SCC的collective invasion時可能扮演的角色。

1. 成功移除OEC-M1內的mycoplasma2. 比較多株口腔癌細胞DDR1 autophosphorylation的情形 初步結果顯示台灣地區口腔癌細胞株的DDR1 tyrosine phosphorylation的程度較高3. 一系列K-RTA vs. CDK1,2,6,9的in vitro kinase assay 仍須再試條件 讓結果更明顯 希望會成功!!!

1. 除了OEC-M1以外 其他的口腔癌細胞株都沒有mycoplasma的污染2. 多株口腔癌細胞株DDR1表達量之比較3. shDDR1及Glivec對於非台灣地區 口腔癌細胞的影響4. 持續測試OSCCs之DDR1 activity (phospho-Tyrosine status)

整理departmental seminar時 大家的問題與建議接下來要進行的部分:1. DDR1是否是constutively active form2. 延長shDDR1給予時間 觀察細胞反應3. 不同稀釋之病毒液 是否能有dose的抑制效果 或要選擇不同的shDDR1 clone4. 加入其他oral cancer cells