09/25 Lab Meeting- 小嬿
Progress report 1. 比對RRE與CBS的差異. RRE的序列可能為16~18 bp, 主要由兩個core element(GNCC和GGNG)和中間間隔的8~10個nucleotides所組成. 若以分析RRE方式分析CBS, 可發現CBS與RRE的序列組合有高度相似性, CBS也有兩個core element, 差別在於隔開core element的序列只有7個nucleotide.–> Rta是否可能透過結合在類似CBS的DNA序列干擾CTCF對基因表現的調控.–>> 注意CpG, RRE, CBS相對位置 2. 觀察在EREV8和ERKV細胞中, Rta所調控基因的蛋白及RNA表現量的改變. EBV Rta在Dox誘導表現之下, 可在3小時被偵測到; 而細胞週期調控蛋白c-Myc和CCND1在Rta表現3-6小時表現量下降; p21及14-3-3σ在6小時表現量上升; 病毒溶裂期蛋白則在12-24小時才有明顯的表現量產生. –> Rta表現後改變許多細胞周期相關基因的表現, 而這些基因的promoter或intron上有CBS存在. 3. CTCF 可能扮演壓制EBV或KSHV不能進入lytic cycle複製的角色. 若外送質體表現較多的CTCF於細胞中, 可以發現EBV和KSHV的溶裂期蛋白表現被抑制, 細胞中的病毒DNA套數減少; 相反地, 以shRNA方式減低CTCF表現量時, 可以發現EBV和KSHV病毒的溶裂期蛋白表現, 並且細胞中的病毒DNA有增加的趨勢. 4. Rta結合於DNA上的功能對於基因的調控是重要的. 外送EBV Rta的DNA binding mutant(K156A)進入細胞中, 可以發現Rta原來調控的基因, 在K156A組別中的反應都較小. 5. EBV Rta結合到DNA上讓CTCF無法穩定地坐落於DNA上. 以ChIP assay觀察目標DNA片段, 可以看到大約在Rta表現6-12小時就可看到Rta結合在DNA上, 而CTCF的訊號則在較後面的時間點(24小時)變弱.–>> […]
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