May 4, 2012

1.製備以下表現質體以供濁水溪公司代製兔子多株抗體 (1) pGEXHis_cZ :已分裝保存於-80℃冰箱。可用於WB(1:2000)(萍)、IFA(1:2000)(鏸)及免疫組織染色 (1:1000)(鏸)。(2) pGEXHis_ER_Q320stop and pGEXHis_ER_L550stop : Q320stop已送給濁水溪代製。另外構築pGEXHis_ER_277E-516V做蛋白質表達。(3) pGEXHis_KR_E600stop and pGEXHis_KR_Q658stop :蛋白質表現量太少(失敗)。(4) pGEXHis_BALF3 :蛋白質表現量太少(失敗)。 2.使用EGFP當目標基因來測試建立NP460TetR_ER inducible cell lines的條件：用未稀釋的lentivirus病毒液直接感染6小時後移除，細胞發綠光比例接近100%，之後細胞放大後，使用10 ug/ml zeocin作篩選16天，發現未加Dox與有加Dox的綠光比例類似，建議做WB(flag)作確認。 3.萍使用Mini-PROTEAN II multiscreen apparatus (Bio-rad)來進行抗體最佳稀釋倍數的實驗。相關資料在https://www.bio-rad.com/prd/en/US/LSR/PDP/f9ec3085-b590-44c6-9b36-b36876cad466/Mini-PROTEAN_II_Multiscreen_Apparatus 首先置備只有一個well的膠體，樣品量為單一well*20=200ug (萍通常使用量)，轉漬完的NC膜置於裝置內，略將裝置傾斜後，從下面的孔注入600ul抗體稀釋液(避免氣泡)，室溫靜置2小時後，以Tip移除抗體稀釋液，用TBST清洗3次後，將裝置打開把NC膜拿出，進行後續二抗的雜交實驗。