September 28, 2011

學姐, 教師節快樂!! 進度報告:1. 利用Chromatin IP的sample做IP-WB測試CTCF/Flag/Rta抗體使用量:(1) CTCF使用cell signaling的rabbit Ab(12 ul)效果較佳(2) Flag使用cell signaling的rabbit Ab(12 ul)效果較佳, 但抗體未完全bind在磁珠上, 可再降低抗體量(3) Rta抗體(Argene)黏附於磁珠的效果不佳, 所抓到的Rta量也不多–> 確定sonication條件之後就可以上述兩個較好的抗體做ChIP! 2. 測試Akata-EGFP/EBV產出的病毒infect HEK293細胞的效率(1) 以IgG-48hrs的效果最好, 但所看到GFP(+)的細胞大部分都不健康–>調整病毒濃縮的倍數, 看看是不是病毒太多, 或PEG太多讓細胞有毒性(2) 將infect 48hrs的細胞收下測得微弱的Rta跟size較小的Zta–> Z若未經modification應為29kDa, 用western看到Akata strain的Z約38kDa, 比B95.8大(約36kDa); 而truncated form最小, 約31kDa(推算); 之後可收RNA, 看所測到的Z是否有truncation.