October 23, 2008

Sample ID:A(Luc48)B(Luc24off24)C(ER48) D(ER24off24)E(KR48) F(KR24off24)G(EV48) H(EV24off24)I(KV48) J(KV24off24) 預計流程(可再議)各細胞maintain者在星期五種三個十公分盤細胞在含藥培養其中,分別為Monday(2M),Tuesday(1.5M), Wednesday(1M)。隔週週一,取Monday盤細胞,種兩個6孔盤(0.5M/well)培養在不含藥的tet-free medium中。週二加dox,週三取一盤6孔盤做wash-off步驟,週四收細胞(五格for RNA,一格for protein)。這是三個重複中的第一組。三個重複中的第二組:週二取Tuesday盤細胞,種兩個6孔盤(0.5M/well)培養在不含藥的tet-free medium中。週三加dox,週四取一盤6孔盤做wash-off步驟,週五收細胞(五格for RNA,一格for protein)。三個重複中的第三組:週三取Tuesday盤細胞,種兩個6孔盤(0.5M/well)培養在不含藥的tet-free medium中。週四加dox,週五取一盤6孔盤做wash-off步驟,週六收細胞(五格for RNA,一格for protein)。哪 一組細胞送抽RNA做microarray呢?把30個protein sample先抽好做flag及p21測試,看induction及wash-off情形再定。因為要抽RNA,所以所有細胞harvest下來後均勻拍 散,全部先放進-80C冰箱待用。5M細胞約可抽出50ug RNA,而我們的需要量是3~5ug左右。——————————————————————————————–2008/10/16 SFL wrote:Purpose: To analyze transcriptome changes modulated by R. Fact1: Treatment of TetER for 24h, remove dox, ER is depleted in 24h.Fact2: Treatment of TetKR for 24h, remove dox, KR is depleted in 24h.Fact3:

10/23/2008 SFL wrote: 已安全過關,謝謝大家配合演出。改進事項: 1.藥品間貼上”毒性化學物質運作場所”之大紅長條標籤(警示來客用)。 2.確實知道沖洗眼睛,緊急淋浴拉環,滅火器所在地點與操作方法。 3.MSDS 是化學藥品的身分證。做什麼用呢?中毒時解毒用。所以有毒的東西MSDS一定要印出來。現在實驗室內有哪幾樣是絕對要有身份證的呢?甲醛,氯仿,丙烯醯 胺,鹽酸,丙酮(acetone),乙酸酐(glacial acetic acid)。新款16項樣式的MSDS在這裡下載。其餘藥品的MSDS在與其它實驗室商量過後再說。以後丙烯醯胺要有使用登記記錄,我建議每二週輪報大meeting時登錄一下。三個月後考慮改為由化安負責人每個月登記一次即可(要跟他們嗆說每天吃飯,久了之後就知道一家子多久該添一次米,不需要每天報告)。謝謝。 4.拖盤,急救箱待購。臨檢時間日期待查。垃圾丟棄方式協調統一中,有任何好點子請隨時不吝分享(這時…北海小英雄搓搓鼻子,靈活眼珠子轉了一下,說了一聲”有了!”)。 5.雖然不舒服,日後操作實驗時還是請大家盡量穿著實驗衣,保護自己。另外,嚴禁飲食(沈重肅然地在說…)。