Dual Luciferase assay: 所以,測試結果簡述如下. (1) Internal control: pFA-GAL4 系列因KRTA/TA在40ng/well/24-well plate含有約1K~2K的內生性renilla luciferase活性,所以最後選擇以活性最高的pEF1-RL為internal control. pLenti-Flag系列因pEF1-RL在不同activator:reporter比例被活化的程度不一, 所以選擇以variaion較少的pTK-RL或pTK-hRL為internal control. (3)(叮嚀:日後碰到)
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Widespread changes in protein synthesis induced by microRNAs / The impact ofmicroRNAs on protein output MicroRNAs可通過抑制一個信使RNA（mRNA）的轉錄或通過誘導其降解來調控基因表達。 雖然以前的研究工作已經在mRNA層面上對這種調控進行了測量，但過去對有多少調控發生在蛋白層面上仍不知道。現在，由David Bartel和Nikolaus Rajewsky領導的兩個小組，利用被稱為SILAC（全稱為“利用細胞培養中的氨基酸進行穩定同位素標記”）的方法的變通形式，對蛋白層面上所發生的蛋白組範圍內的變化作為內生和外生microRNAs的表達的一個函數進行了測量。他們發現，雖然microRNAs能直接抑制數百個基因的轉錄，但更多的間接效應卻能導致數千個基因的表達發生變化。然而，所觀察到的很多變化在數量級上不到兩倍，表明不管是直接還是間接，microRNAs都能充當“可變電阻器”，來微調蛋白合成，以便在任何一個給定的時間都能與細胞的需求相匹配。（Articles Nature 2008 SePost Optionsp-4-Vol 455:pp. 58, 64; Author page）
微RNA在蛋白層面上對基因表達的調控程度（MiRNA tunes proteins） Read More »